● 微生物樣品采集與保存操作規程

1、普通土壤樣本采集

根據研究目的確定采樣范圍，取樣器具要事先消毒滅菌處理，開始采樣，去除表面浮土，使用乙醇火燒的鏟子挖取地下5~20cm的土層，去除可見雜質后，土壤過2mm篩網，每個樣品從3個及以上采樣點采集并混合而成，去除雜質之后的樣品每管可收集分裝3g~5g，保存于無菌離心管中，置于0℃以下運回實驗室，用于抽提DNA，如不能馬上實驗，置于-80℃保存。土壤樣品強烈建議使用5ml EP或15ml、50ml離心管進行裝載，并用封口膜封口，使用自封袋容易撒漏導致樣品交叉污染。

2、根際土壤樣本采集

使用的工器具要事先消毒滅菌處理，采集20cm深的根際土壤于50mL的無菌管里，迅速放在液氮里儲存，用20目的篩子過篩，去除植物根、動物殘骸以及其他雜質后分裝到無菌離心管里，每管3~5g，密封后立即-80℃儲存備用。

3、水體樣本采集

根據研究目的確定采樣深度和范圍，采集好的水樣需要通過濾膜進行過濾，可以根據水樣的渾濁程度選擇相應孔徑的濾膜，之后-80℃保存備用。

清洗水樣：可選擇小孔徑的濾膜，一般選0.22μm或0.45μm的濾膜，過濾水樣體積大于10L；

渾濁水樣：過濾前靜置分離懸浮顆粒，也可以用大孔徑的濾膜預過濾一遍，再用小孔徑的濾膜進行過濾。

水樣過濾之后，可將微生物富集的濾膜裝在 50ml 離心管中（濾膜面積不應過大，取直徑 3-4cm 富含微生物的部分即可），或使用緩沖液洗脫濾膜，將洗脫后的緩沖液置于離心管中并用封口膜封口，公司不接受大體積未過濾的水樣。